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      使用 dsGreen 對凝膠進(jìn)行 DNA 染色

      更新時(shí)間:2024-03-13點(diǎn)擊次數:343

      dsGreen 是一種特異性結合雙鏈 DNA 的熒光染料。染色方案有三種變體:凝膠浸泡、凝膠預染色和樣品預染色。

      凝膠浸泡

      瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠的經(jīng)典方法。

      1. 在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中運行樣品。

      2. 在燒杯中,將 10 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 100 mL 1× TE、TBE 或 TAE 緩沖液(對于小型凝膠),或將 50 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液添加至 500 mL 1 × TE、TBE 或 TAE 緩沖液(用于中型凝膠)。用抹刀、棒或磁力攪拌器充分混合。

      3. 將稀釋的 dsGreen 溶液倒入適當的托盤(pán)或平底鍋中,并浸沒(méi)凝膠。

      4. 將凝膠浸泡 5-10 分鐘。

      5. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈(365 nm),但這種光源的激發(fā)效率稍低。

      凝膠預染色

      該方法僅適用于瓊脂糖凝膠,不適用于 PAAG。注意——這種染色方法有時(shí)會(huì )導致條帶變形或形成污點(diǎn)。在這種情況下使用凝膠浸泡。

      1. 使用微波爐或加熱裝置將緩沖液中的瓊脂糖煮沸至溶解。

      2. 在仍為液體時(shí),每 10 mL 凝膠溶液添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO 溶液。充分混合。

      3. 倒入凝膠并使其凝固。

      4. 為了獲得最佳結果,在陽(yáng)極附近每 10 mL 緩沖液中添加 1 µL 10,000× dsGreen DMSO溶液(“+",紅線(xiàn))。

      5. 運行示例??梢栽?254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監測遷移帶。

      6. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈(365 nm),但這種光源的激發(fā)效率稍低。

      樣品預染色

      不敏感、且經(jīng)濟的方法。

      1. 在 DMSO 中混合 25 µL DMSO 和 1 µL 10,000× dsGreen 溶液。

      2. 將 1 µL 溶液添加到每個(gè)要在瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠上分離的樣品中。

      3. 運行示例??梢栽?254 nm 低壓汞燈下實(shí)時(shí)監測遷移帶。

      4. 使用可用光源和綠色/黃色濾光片查看或記錄凝膠。藍光透射儀或紫外低壓汞燈 (254 nm) 可用于可視化 dsGreen 染色的凝膠。也可以使用高壓汞燈(365 nm),但這種光源的激發(fā)效率稍低。



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